介紹液相色譜硅膠鍵合反相柱上的蛋白質(zhì)殘余清洗方法

在檢測生物物質(zhì)如血漿或血清等積累在反相色譜柱上，必須采用不同與其他物質(zhì)的清洗方法。大部分情況下，純有機溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質(zhì)，因此不能有效地清洗柱子。反而，有機溶劑和緩沖液、酸、離子對試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果，建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前，了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質(zhì)的柱子通常來說都是相容的，但有機聚合物基質(zhì)的柱子可能會在某些溶劑組合中膨脹或收縮，這樣會影響色譜柱的柱效。
在使用指定溶劑清洗反相色譜柱時，須對每個溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大，沖洗的流速應該相應調(diào)整以確保不會超過泵壓。當檢測的是尿液等樣品溶液時，至少應該用40～50體積的HPLC級水來沖洗柱子。
對于反相柱子，不建議用表面活性劑如十二烷基磺酸鈉（SDS）和三硝基甲苯，因為這些化合物必然會牢固吸附在硅膠鍵合相柱子上很難除去。用表面活性劑會影響裝填表面而改變其性質(zhì)。然而有一個分離小組的研究表明由某個小組做的污染后的柱子可以用500μL1％SDS溶液用1ml/min的流速清除下多肽合成產(chǎn)物。如果繼續(xù)用從5%～95%含1%三氟乙酸的乙晴梯度洗脫，可以恢復多肽的分離。